Mikropipet yang dipakai dengan teknik salah adalah sumber galat pengukuran paling umum di laboratorium — lebih sering daripada alat yang rusak atau kalibrasi yang meleset. Volume yang tertera di skala tidak berarti apa-apa kalau teknik pemipetan yang mengeluarkannya salah. Berikut urutan yang benar.
Sebelum Memipet
Pilih mikropipet sesuai rentang volume. Setiap mikropipet punya rentang kerja tertentu (misalnya 2–20 µL, 20–200 µL, 100–1000 µL). Mengatur mikropipet 20–200 µL ke angka 15 µL akan memberi hasil yang jauh kurang akurat dibanding memakai mikropipet 2–20 µL untuk volume yang sama — piston bergerak terlalu sedikit untuk terkalibrasi dengan baik di ujung bawah rentangnya.
Pasang tip yang sesuai. Tip yang tidak pas (goyang atau terlalu longgar) membuat segel udara bocor, dan volume yang terhisap tidak akan sesuai skala. Tekan tip ke shaft dengan sedikit gerakan memutar sampai terasa kencang, jangan hanya menekan lurus ke bawah.
Samakan suhu cairan dan mikropipet dengan suhu ruang. Memipet cairan dingin (baru keluar dari kulkas) dengan mikropipet bersuhu ruang membuat udara di dalam tip mengembang saat menghangat, dan volume yang keluar akan lebih sedikit dari yang diatur.
Teknik Pemipetan Maju (Forward Pipetting)
Cara standar untuk sebagian besar cairan (air, buffer, larutan encer):
- Tekan tombol pengisap sampai stop pertama (bukan stop kedua).
- Celupkan tip ke dalam cairan sedalam 2–4 mm — jangan lebih dalam, karena permukaan tip ikut membawa cairan berlebih di bagian luarnya.
- Lepas tombol secara perlahan dan terkontrol, bukan menyentak. Tunggu sekitar 1 detik sebelum menarik tip keluar, supaya cairan naik penuh.
- Untuk mengeluarkan, tempelkan ujung tip ke dinding wadah tujuan dengan sudut sekitar 10–45°, lalu tekan tombol sampai stop pertama, tahan sebentar, baru tekan sampai stop kedua (blow-out) untuk mengeluarkan sisa cairan di ujung tip.
- Lepas tombol baru tarik tip menjauh dari dinding wadah — melepas tombol sambil tip masih menempel bisa menghisap kembali sebagian cairan yang baru dikeluarkan.
Pre-wetting (membasahi tip) meningkatkan akurasi untuk volume kecil: tarik dan keluarkan cairan yang sama 2–3 kali sebelum pengukuran yang sesungguhnya, sebelum menarik volume yang akan dipakai. Ini menjenuhkan udara di dalam tip dengan uap cairan, mengurangi penguapan yang membuat volume terukur sedikit lebih kecil dari seharusnya.
Teknik Pemipetan Terbalik (Reverse Pipetting)
Untuk cairan kental (gliserol, protein pekat) atau cairan yang mudah berbusa (larutan mengandung deterjen/surfaktan), forward pipetting sering meninggalkan sisa cairan di dalam tip atau menarik gelembung udara:
- Tekan tombol sampai stop kedua (bukan yang pertama).
- Celupkan tip, lepas tombol perlahan sampai posisi awal — ini menarik lebih banyak cairan dari volume yang diatur.
- Keluarkan volume yang diinginkan dengan menekan hanya sampai stop pertama. Sisa cairan yang tertinggal di tip (cadangan dari langkah 2) dibuang bersama tip, tidak ikut ke wadah tujuan.
Kesalahan yang Paling Sering Terjadi
- Memiringkan mikropipet terlalu jauh saat menghisap (lebih dari 20° dari vertikal) — membuat volume terukur tidak konsisten.
- Menahan mikropipet terbalik setelah menghisap cairan, membiarkan cairan mengalir balik ke dalam shaft — bisa mengontaminasi bagian dalam alat dan butuh servis.
- Memakai ulang tip untuk cairan atau sampel berbeda — risiko kontaminasi silang, terutama untuk kerja PCR dan kultur sel.
- Mengabaikan jadwal kalibrasi. Mikropipet yang dipakai setiap hari idealnya dikalibrasi ulang setiap 6–12 bulan tergantung intensitas pemakaian — piston dan seal internal aus meski teknik pemipetannya sudah benar.
Kapan Perlu Kalibrasi Ulang
Tanda mikropipet perlu diperiksa: hasil yang tidak konsisten antar pengulangan, tombol terasa lebih berat atau kasar dari biasanya, atau tip sulit terpasang kencang. IBS menyediakan layanan kalibrasi untuk mikropipet dan instrumen laboratorium lain yang kami pasok — lihat halaman Dukungan untuk cakupan layanannya, atau hubungi kami langsung.
Lihat lini mikropipet yang kami sediakan di halaman Mikropipet Laboratorium.
